怎样提高实验灵敏度
使用固相阻断剂缓冲液
固相阻断剂缓冲液可以用于阻止非特异性结 合，降低本底干扰，稳定包被蛋白，从而有效 提高免疫分析灵敏度。固相阻断剂主要是通过 占据没有被包被的空间表位以防其他非特异性 的蛋白或生物分子结合，从而达到阻断效果。
推荐使用的材料: J82100B ELISA的阻断剂缓冲液 J82300B 横向免疫层析含阻断剂的PBS缓冲液 J16430D 包被稳定剂和阻断剂缓冲液
使用IgG吸附剂去除IgG抗体和类风湿因子的干扰
由于病人样本中含有IgG抗体，致使IgM抗体 检测的灵敏度和特异性受到影响。样本中的 IgG抗体主要通过两种机制对IgM抗体检测造 成干扰，导致错误的检测结果： •通过竞争特异性IgM的结合位点 •通过与类风湿因子（RF）形成的免疫复合物 竞争特异性IgM的结合位点 通过山羊抗人IgG抗体预处理病人样本可以有 加入效地除去IgG和RF-IgM复合体的干扰。
推荐使用的材料: L15406G 山 羊抗人IgG FC (GAHG) 加入病人样本前进行稀释。
推荐稀释比例为1:10，用PBS进行稀释。按照1:10的 比例加入病人样本中，孵育5-30分钟。 IgM 稀释液 取一个单独的反应管，病人血清样本与IgM 稀释液按照1:21或者更高稀释比例（混合均匀） 进行稀释。稀释步骤必须与其他试验步骤一致进行 规范化处理。
8120
怎样使用阻断剂缓冲液和山羊抗人IgG抗体
通用试验程序 步骤 1 优化微孔板/硝酸 纤维素膜捕获（包被）抗原 条件 A．微孔板包被抗原：用碱性缓 冲体系，如磷酸盐缓冲液(pH 7.4)或碳酸盐缓冲液(pH 9.4) 将抗原稀释为2-10 μg/mL工 作浓度； B．将加入工作浓度抗原后的微孔 板在4-37°C孵育几个小时，或 者过夜； C．去除包被缓冲液，洗板，这样 抗原就被固定在微孔板上了。
步骤2 添加阻断剂缓冲液 A. 直接在微孔，印迹膜或硝酸纤维 素膜加入阻断剂溶液（根据实验 的设计）。 使用浓度为1X 或者进一步稀释 ELISA 阻断剂缓冲液: Cat# J82100B 横向免疫层析阻断剂缓冲液: Cat# J82300B 包被稳定剂和阻断剂缓冲液: Cat# J16430D B.室温孵育30分钟-2小时 C. 根据实验要求继续进行后续试 验操作
步骤4 将病人样本复合物加 入到反应孔中 A. 病人样本与捕获（包被）抗原 进行孵育 B. 进行洗涤步骤，去除没有结合 的试剂
步骤3 将病人血清样本中加 入GAHG进行预处理 A. 按照1:10比例用PBS稀释GAH IgG B. 将稀释后的GAH IgG按照1:10比 例加入到病人样本中，并混匀 C. 孵育3-5分钟后进行检验
抗原被包被在微 孔板上，如果病 人样本中含有IgM 抗体，那么该抗 体就会与抗原进 行反应
山羊抗人IgG
含有IgG和IgM 抗体的病人血 清样本
病人样本
病人的血清样本 和GAH IgG预处 理后先加入微孔
GAHG与病人 样本中IgG形 成复合物
步骤5 通过直接法或间接法 进行检测
板上包被抗原
www.MeridianBioscience.com/LifeScience | 5
Powered by FlippingBook