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多重分子检测
分子多重检测可以一次检测多个靶标，从而大大降低成本。与单重检测相比，多重检测使用更少的试 剂，更少的时间和更少的劳力来达到相同的结果。分子检测的性能取决于其准确检测低水平病原体的 能力，而在多重检测中，这一挑战将大大增加。同一样本中不同检测靶标含量的不同可能导致一个靶 标比另一个靶标更优先扩增，以及PCR漂移—由低浓度靶标引起的随机变化。包括扩增序列的物化特 性、长度、GC含量、侧边区域和二级结构的可变性等这些因素都可能引起多重检测中不同靶标扩增 的不平衡性，从而对Ct值产生影响 1 。
为了克服这些挑战，使用优化的分子检测试剂以确保多重检测 中Ct值保持不变，并保持检测对每个目标的高灵敏度非常重 要。迈迪安公司开发的Fast 1-Step RT-qPCR Mix快速一步法 RT-qPCR预混液（MDX032）是专门为多重分子RT-qPCR诊断 检测和高通量自动化平台而设计的。该试剂中含有优化的聚合 酶、dNTP、Mg 2+ 和缓冲液（保证pH值在反应过程中没有变 化），能提供最佳的多重扩增性能。 多重检测的另一个主要问题是可能会因PCR抑制而产生假阴性 结果或因PCR扩增子携带污染而产生假阳性结果，特别是在较 复杂的多重检测平台上。大多数检测方案要求在检测前提取 DNA或RNA，以去除临床样本（如鼻咽或痰标本）中存在的 PCR抑制物。但是核酸提取操作也存在一些潜在问题，例如有 可能导致样品损失，并不能完全有效地去除所有的抑制物。此 外，在新冠疫情的第一波高峰期间，对分子检测的巨大需求造 成了RNA提取试剂的短缺。面对这种供应短缺的挑战，诊断试 剂开发商转而寻求直接扩增的替代方法，以免除DNA/RNA提 取的步骤。 为了解决这些问题，迈迪安公司开始专注研发抗抑性的分子检 测试剂，用于对原始临床样本的直接扩增，而无需进行核酸提 取。迈迪安开发的第一个直扩型试剂，Inhibitor-Tolerant RT-qPCR Mix 抗抑性RT-qPCR预混液（MDX016），就是专门 设计对不同来源的粗裂解液或富含抑制物的样品进行多重定量 检测。该试剂可用于直接扩增，从而大大减少检测定量步骤， 加快检测速度，提高样本到结果的周转时间。
Figure 2. 临床样本直接检测步骤
与单重检测相比， 多重检测在使用试剂量 更少、操作时间更短和消 耗人力资源更少的情况下， 就能获得与单重检测 同样的结果。
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