Meridian 迈迪安无甘油NGS建库试剂解决方案
Meridian提供建库全步骤中所需的分子酶，对带有 5’ 和 3’ 悬垂的片段进行修复以形成钝末端，然后对这些片段进行磷酸化和 A-尾化处理， 使末端适于适配体连接。连接测序适配体后，形成完整的测序就绪文库片段。
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
步骤1 片段化 通过物理或酶学法
5’
5’
3’
3’
5’ 3’
5’ 3’
3’
5’
5’
3’
5’
5’
5’
5’
3’
3’
5’ overhang 3’ 3’
3’ overhang
5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
3’
3’
5’
5’
5’
5’
3’
3’
5’ overhang
5’ overhang
3’ overhang
3’ overhang
5’
5’
3’
3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
3’
5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’
5’
3’
5’ 5’ 5’ 3’
5’ 5’ 5’ 3’
3’ 3’
3’ 3’
5’ overhang
3’ overhang
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
末端修复
步骤2
(3’ – 5’ exonuclease activity)
(Fill in 3’ – 5’ direction)
3’ 3’
5’ 5’
5’ 5’
3’ 3’
5’ 5’ overhang 5’ overhang 5’ overhang P 3’
3’ overhang 3’ overhang 3’ overhang 5’ 3’ 5’ 3’
无甘油 T4 DNA 聚合酶 (HC) (MDX207) 见第3页 无甘油 DNA Pol I Klenow大片段 (HC) (MDX208) 见第3页
5’
3’ 5’ 3’
(3’ – 5’ exonuclease activity) (3’ – 5’ exonuclease activity)
(Fill in 3’ – 5’ direction) (Fill in 3’ – 5’ direction)
5’ 3’
5’ 3’
5’
5’
3’
3’
5’ 3’ 5’ 3’ 5’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ (3’ – 5’ exonuclease activity) (3’ – 5’ exonuclease activity) (3’ – 5’ exonuclease activity) 5’ 3’ (3’ – 5’ exonuclease activity) 去除3’-悬空末端 P 3’ 3’ P 5’ 3’ P
(Fill in 3’ – 5’ direction) 填充5’-突出末端
P
P
5’
5’
3’
P 5’ (Fill in 3’ – 5’ direction) (Fill in 3’ – 5’ direction) (Fill in 3’ – 5’ direction) 5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
3’
3’
P
5’
磷酸化
步骤3
A
3’
无甘油 T4多聚核苷酸激酶 (HC) (MDX206) 见第4页
P P
5’ 5’
3’
3’
5’
P 3’
P 5’ 5’
3’ 3’
A
P A
A
5’
3’
3’ 3’ P 5’ P 5’ P 5’ A- 5’ A 3’ 3’ A 3’ -T A -T
P 3’
-A 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ A A
P P 3’ P
3’ 5’
P
A
-T
5’
3’ 3’ P
A-尾
步骤4
A-
T- A 5’
P
Adaptor -A T- -A T-
无甘油 Taq HS 聚合酶 50 U/μL (MDX170) 见第5页
3’ 3’
Adaptor
A A P 5’ A- 3’ A -T A-
P P
3’
Adaptor
Adaptor
Adaptor
Adaptor
-A
T-
5’
P
Adaptor
-T -T A-
Adaptor -A
Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor 适配子
Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor 适配子 Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor
A- A-
T- T-
链接适配子
步骤5
-A
无甘油 T4 DNA 连接酶 (HC) (MDX200) 见第5页
-T
-A
T-
无甘油高保真Pfu聚合酶 (HC) (MDX203) 见第6页 步骤6 文库扩增
2
Powered by FlippingBook