Meridian迈迪安无甘油NGS建库试剂解决方案 Meridian提供建库全步骤中所需的分子酶，对带有 5’ 和 3’ 悬垂的片段进行修复以形成钝末端，然后对这些片段进行磷酸化和 A-尾化处理，使末端适于适配体连接。连接测序适配体后，形成完整的测序就绪文库片段。
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
步骤1
片段化
5’
5’
3’
3’
3’
5’
5’
3’
冻干NGS DNA打断酶 (MDX224) 见第3页
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ overhang
3’ overhang
5’
5’
5’
3’
5’
3’
3’
3’
3’
3’
5’
5’
5’
5’
3’
3’
5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’
5’ overhang 5’ overhang
3’ overhang 3’ overhang 3’ overhang
5’ overhang
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’
5’
3’ 3’ 3’ 3’ 5’
3’
3’
5’ 3’ 5’
5’
3’
(3’ – 5’ exonuclease activity)
(Fill in 3’ – 5’ direction)
5’ 3’
5’ 5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’
5’ overhang
3’ overhang
5’ 3’
5’ 3’
步骤2
末端修复
3’
3’ 3’
5’ 5’
5’ 5’
3’ 3’
(3’ – 5’ exonuclease activity) (3’ – 5’ exonuclease activity)
(Fill in 3’ – 5’ direction) (Fill in 3’ – 5’ direction)
无甘油 T4 DNA 聚合酶 (HC) (MDX207) 见第4页 无甘油 DNA Pol I Klenow大片段 (HC) (MDX208) 见第4页
5’ 5’ overhang 3’ 5’ overhang 5’ overhang 5’ P 5’ 3’ P 3’ P
3’ 3’ overhang 5’ 5’
5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
3’
5’
5’
5’ 3’ overhang (3’ – 5’ exonuclease activity) P ( 去除 3’ — 5’ 悬空末端 )
(Fill in 3’ – 5’ direction) ( 填充 3’ — 5’ 突出末端 )
3’
5’
5’
3’
5’ 3’ 5’ 3’ 5’
5’ 3’ 5’ 3’
3’
3’
3’ overhang
3’
3’
5’
P
P
P 5’ P
(3’ – 5’ exonuclease activity)
(Fill in 3’ – 5’ direction)
A
5’
3’
步骤3
磷酸化
3’
3’
P A 5’ 3’ 5’
5’ 3’
5’ 3’
5’ 3’
5’ (3’ – 5’ exonuclease activity) (3’ – 5’ exonuclease activity) P 3’ A 3’
A
(Fill in 3’ – 5’ direction)
3’ P 5’
5’ 5’ A 5’
无甘油 T4多聚核苷酸激酶 (HC) (MDX206) 见第5页
P P
3’
(Fill in 3’ – 5’ direction)
3’
3’ 3’
3’ 3’ A
5’
-A 5’
P
P
5’ 5’
P 3’
P 5’
-T
T- A
A-
P
5’ A-
3’
3’
Adaptor P -A -A
A -T
Adaptor
A 5’
-T
P 5’ P 5’ A 3’ A-
P T-
T-
步骤4
A-尾
5’
3’ 3’ P
3’ 3’
无甘油 Taq HS 聚合酶 50 U/μL (MDX170) 见第6页
Adaptor
Adaptor
Adaptor
Adaptor
5’ 5’ A A
P P -A
-T
Adaptor
A P 5’ A-
Adaptor T-
3’
3’
Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor
Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor Adaptor 适配子
-T
-A P -A
A- A
5’
Adaptor
T-
步骤5
链接适配子
-T
A-
T-
无甘油 T4 DNA 连接酶 (HC) (MDX200) 见第6页
-T
-A
A-
T-
Adaptor Adaptor 适配子
Adaptor
Adaptor
无甘油高保真Pfu聚合酶 (HC) (MDX203) 见第7页 步骤6 文库扩增
Adaptor
Adaptor
2
meridianbioscience.com/lifescience
Powered by FlippingBook