通过单一对照同时检测提取和抑制 剂的共同纯化过程
qPCR 提取对照 通过单一对照同时检测提取和抑制 剂的共同纯化过程
IVD分子公司正面临越来越严格的法规，需要在检测中包含适当的阴性和阳性对照。 qPCR检测的一种常见做法是在DNA提取后将已知数量的对照DNA加入样本中。提取后添加对照DNA可以 监测检测内的抑制作用，但作为提取对照没有价值。理想的情况是，在qPCR之前，检测样品和内控对照经 过完全相同的处理。
Product Overview
• 提取对照与样本经过相同的处理过程 • 可用于多种样品类型，包括血、尿、痰等含丰富抑制剂的样品 • 确认提取步骤的成功，并监测PCR抑制剂的共纯化 • 专为多重qPCR检测设计的探针 • 内控DNA含有独一无二的序列，与任何生物体都没有同源性
迈迪安公司开发了一种用于qPCR诊断检测的新型提取对照方法，与传统方法相比，该方法能够更接近地模拟测试 样本。这为监测提取步骤的成功与否以及是否存在任何可能影响检测结果的共纯化抑制剂提供了优势。 qPCR提取控制使用已知浓度的大肠杆菌细胞， 其含有内控DNA序列(与任何生物体没有已知同源性，因此它不会 干扰样本目标DNA的检测)。检测样品中的遗传物质与DNA提取控制同时采用常用的提取方法提取，该方法对抑制 剂和提取失败的敏感性与检测样品相同。
产品
产品编号 体积
反应数
qPCR 提取对照-红色
MDX026
10 mL
2,000 Rxn
qPCR 提取对照-橙色
MDX027
10 mL
2,000 Rxn
www.MeridianBioscience.com/Lifescience
使用流程
提取前将qPCR提取控制与检测样品一起添加到裂解缓冲液中，监测不良的提取收 率、PCR抑制、不正确的移液或循环参数。
Control mix (includes primer and probes for control) is added to the reaction mixture
qPCR 提取对照
裂解&提取
检测设定
qPCR 结果
可能结果 靶标 内控DNA 解读 1 + +
检测到靶标和内控DNA
检测样本
未检测到靶标，检测到内控DNA， 表明提取成功，qPCR反应成功。
2
-
+
qPCR 提取控制从裂解和提取 开始进行监测
3 4
-
- -
无效结果:靶标及内控DNA均未检出，重新检测。
+
无效结果: 内控DNA未检测出，重新检测。
产品亮点
qPCR 提取控制在监测抑制作用上与添加内控DNA检测相同
从HEK293 细胞里扩增A) Spiked 内控l DNA (绿色)and B) qPCR 提取控制（红色) 。 使用标准的基因组DNA提取试剂盒，用PBS 代替裂解缓冲液或结合缓冲液模拟低效提取。 条件是在95°C 10 s, 60°C 30 s下10分钟。 这两种控制类型在完全裂解步骤(红色)， 无裂解(橙色)以及无结合缓冲液(绿色)的 结果是相同的。
A
B
适用于单重或多重反应
A
B
C
从HEK293细胞中扩增 A) β2微球蛋白的片段(ß2MG) 和B)GAPDH基因，以及C)从qPCR提取控制中扩增内控序列。 条件为95°C下10min, 50个循环95°C 10 s, 60°C 30 s。结果表明，该方法单重反应和多重反应的无Ct值差异。
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