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研究 1 唾液特异性预混液显示更强的抗抑性和更快速的扩增性能
目的： 比较Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液 （MDX131）、Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液 （MDX095）及对比试剂在多重检测中检测SARS-CoV-2 RNA 的性能（靶点：ORF1ab（FAM），N蛋白（ROX）和GAPDH 内参（Cy5））。 新冠患者体内提取的唾液经RNA提取或粗裂解处理样本，取 半数组织培养感染剂量（TCID50）为1,000拷贝/毫升为模板 进行扩增。 方法： 从SARS-CoV-2病毒感染患者体内提取的唾液样本经过RNA提 取或简单裂解液处理（50 μL 唾液样本加入 50 μL裂解液后在 95°C加热5分钟，经过11,000 rpm涡旋1分钟取上清液）。 qPCR反应设置：5 μL，4x 预混液（MDX131MDX095或对比 试剂），1 μL引物探针混合物 4 μL DEPC 水及 5 μL提取的
RNA模板或粗裂解液。qPCR扩增设置：逆转录 55°C x 10分 钟，95°C x 3分钟，（95°C x 10秒，60°Cx45秒，69°Cx20 秒）x46个循环。 结果： 对提取的RNA和唾液粗裂解液样本的扩增中，Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）的Ct值比 Air-Dryable™可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）和 对比试剂更提前。这表明MDX131对唾液中存在的抑制物， 包括提取的RNA中残留的抑制物，比其他预混液有更强的耐 受能力。无论是直接扩增还是扩增还是提取的RNA，Air- Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）是超 灵敏唾液POC检测的理想选择。
提取或粗裂解唾液样本中的SARS-CoV-2 检测
A
50
40
30
20
10
0
FAM
ROX
CY5
FAM
ROX
提取的RNA
粗裂解液
MDX095 | MDX131 | Reference Mix
Figure 3. 使用Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131），Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）及对比试剂分别对唾液 样本中提取的RNA模板和唾液粗裂解液进行扩增检测SARS-CoV-2。（A）平均Ct值对比柱形图（B）对应的扩增曲线图。对提取的RNA和粗裂解样本的扩增 中，MDX131在FAM，ROX和Cy5三个通道中的扩增都比MDX095和对比试剂更快。
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