ELISA和LF试验使用阻断剂来减少患者样品中可导致错误结果和不正确诊断的蛋白干扰。 为什么使用阻断剂?
选择最佳的试验形式取决于试验的预期应用, 待分析的样 品类型, 试剂的可获得性以及该试验预期用于一个实验室 的单个分析还是由各种技术人员在很多实验室使用。一般 来说, 免疫分析分为以下几类: • 夹心抗原检测 ELISA - 用于测量目标抗原/分析物的数量 • 抗体捕获 ELISA - 用于筛查特异性靶标的抗体 (例如：lgG,、lgM,、lgA, & lgE) • 竞争性ELISA - 用于检测样品中存在的抗原/分析物, 并且通常用于只有 1-2 个表位的小抗原 在所有试验形式中有几个对检测性能至关重要的常见参数: (1) 固相的选择 (2) 抗体/抗原的选择和 (3) 阻断剂的选择。 为 了使一个试验同时具有高灵敏度和特异性,最关键的因素是选 择对目标分子具有高度特异性的抗体或抗原。但是, 使用阻断 剂也有可能提高试验的灵敏度和特异性。这些阻断剂的功能是 减少使信噪比增加的非特异性结合。 试验中的非特异性相互作用可发生在 (1) 固相与非靶定蛋白之 间, 其吸附在固体底物的表面 (2) 试验本身包含的抗体与患者 样品存在的内源性抗体之间。为了防止非特异性结合, 在固相 包被步骤之后使用封闭缓冲液以阻断所有剩下的开放结合位 点。在样品制备过程中使用其它阻断剂来防止干扰抗体与试验 抗体成分结合。
免疫分析固相的类型 材料
结合力
反应类型
硝化棉
高 高 高 低 低 低
疏水，亲水
PVDF 尼龙
疏水 疏水
板材及管材
聚苯乙烯
疏水 疏水
聚乙烯
衍生化酶标板
共价, 疏水, 亲水
珠类
聚苯乙烯
中
疏水
衍生化聚苯乙烯 高
共价, 疏水, 亲水
微粒
高
共价, 疏水
具有较高的结合能力又对固定抗原或抗体的天然蛋白构 象没有损害的固体表面是最合适的。
单克隆抗体与多克隆抗体之间的关键性能差异
一般来说, 通常选择 MAb 作为一级抗体来建立最高水平的检测特异性, 而选择 PAb 作为二级抗体（二抗）以通过多次结合事件 来增强信号。但是, 任何组合都可以使用。所有候选抗体必须与预期的样品类型一起检测, 从而选出具有最佳性能的抗体。
单克隆抗体 (MAb) • 一般在小鼠中产生或重组, 识别单一 表位。 • 既然只有一个抗体分子可与抗原结 合, 那么其间的相互作用是高度特异 的, 但是可缺乏灵敏度, 这取决于亲 和常数。
多克隆抗体 (PAb) • 在山羊、绵羊、小鸡、小兔和其它动物中产生。 • 多克隆血清是抗体的异质复合物, 具有独特的特异性。该特异性抗体 (PAb)） 的浓度通常在 50-200mg/mL。 • PAbs 能够识别任何一个抗原上的多个表位, 这使它们对抗原突变没有那么敏感。 • 在不太了解抗原的性质时 PAbs 很有用。但是, 它们的数量在宿主动物的寿命内是 有限的。
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