可冻干基因分型FFPE 直扩qPCR预混液 兼容FFPE样本的抗抑性配方，清晰区分 等位基因和卓越的集群分辨率
Lyo-Ready TM Genotyping Direct DNA qPCR FFPE 可冻干基因分型FFPE 直扩qPCR预混液 兼容FFPE样本的抗抑性配方，清晰区分 等位基因和卓越的集群分辨率
Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液是专为检测遗传变异，如单核苷酸变异和拷 贝数变异而优化的无甘油单管配方，可兼容双标签探针。 SNPs（单核苷酸多态性）或点突变是最常见的遗传变异类型，是构成个体之间表型多样性的主要部分。大多数SNP对健康或发育没有影响，但是 它可以用于预测个体对某些药物的反应（药物遗传学），对环境因素（如毒素）的敏感性，以及致病风险（诊断学），也可以用来追踪家族内疾 病相关基因变异的遗传。 血液是诊断中最常用的样本类型，是基因分型分析的理想来源。但是，福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)肿瘤组织也依然被广泛使用，由于可以在室 温下长期保存，为回顾性研究提供了宝贵资源。但是FFPE样本由于DNA的交联和断裂，获得的DNA产量和质量可能很差。尽管通过长时间的操 作，从FFPE样本中提取的DNA进行基因分型检测的成功率仍然很低。 为了简化从FFPE样本中提纯DNA的步骤，迈迪安全新开发了Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液，可以在单管中进行消化组织释 放核酸，而不需要进一步提纯，大大降低了样品损坏、丢失和污染的风险，同时简化和加速检测过程。此外，该试剂既能用于液体体系也能通过 冻干用于开发常温稳定的检测，是用于高通量检测的理想选择。
产品
产品编号 体积 反应数
产品亮点
5 mL 1,000 个反应
Lyo-Ready Genotyping Direct qPCR FFPE, 4x
• 超灵敏、可直接检测低至1个拷贝靶标 • 对FFPE组织中存在的PCR抑制物具有超强耐受性 • 紧密的荧光簇，可清晰地区分等位基因，非常适合困难 的SNP • 可用于液体体系或冻干使用，是高通量或POC检测的理 想选择 • 可兼容不同冻干程序
MDX168
50 mL 10,000 个反应
www.meridianbioscience.com/lifescience
性能数据
Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液结合了先进的化学缓冲液配方、PCR增强剂、以及优化的抗体热启动聚合酶，dNTPs和MgCl 2 为一体，并搭配提供了两管组织提取缓冲液，促进DNA释放，用于对富含PCR抑制物的FFPE粗裂解组织样本进行快速、精确和可靠的等位基因 识别和SNP检测的簇分离。
使用迈迪安MDX168提供的提取缓冲液可获得更高的DNA提取率
500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0
分别使用MDX168提供的提取缓冲液、ATL缓冲液(Qiagen)、G2缓冲液 (Qiagen)和GeneJet FFPE试剂盒提取缓冲液(ThermoFisher)对7mgFFPE肺 组织进行消解处理，并与使用Qiagen QIAamp FFPE组织DNA提取试剂盒获 得的纯化DNA进行比较(作为参考)。结果显示，与提纯的DNA或用其他市售 缓冲液消解的FFPE组织相比，用MDX168提取缓冲液处理获得的DNA产量 明显更高。说明MDX168提取缓冲液对FFPE组织具有较高的DNA提取率。 存储在MDX168提取缓冲液中的DNA在室温下可稳定达24小时，在4℃下可 稳定达3天。
MDX168 提取缓冲液
缓冲液ATL
缓冲液 G2
GeneJet 缓冲液
提纯的DNA
与其他类似试剂对FFPE样本的检测相比而得的荧光簇更紧密，等位基因辨别能力更强
KIT24和PDGFRA(Platelet Derived Growth Factor Receptor α，血小板衍生生长因子受体α)都是受体酪氨酸激酶(RTKs)信号通路的一部分。毛细 血管扩张性共济失调突变(ATM)是一种作用于p53上游的激酶，控制着解决双链DNA断裂的关键DDR通路。这三种基因突变都能在肺癌组织中发 现。 在下图中，分别使用了A/ Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液(MDX168), B/ KAPA Probe Force qPCR Mix (Roche) 和C/ TaqPath ProAmp Multiplex Master Mix (ThermoFisher) 对肺组织FFPE样本中的不同基因进行直接检测。结果显示，与对比试剂相比，Lyo-Ready TM 可冻 干基因分型FFPE直扩qPCR预混液对肺组织FFPE粗处理样本的检测获得更紧密、更明显的簇集，能更准确地区分等位基因。
KIT24_48 基因突变
A)
B)
C)
T/T
C/T
C/C
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
取健康FFPE肺组织 (野生型)和含有KIT24_48突变的肺肿瘤FFPE组织 (突变型) 混合在一起，使用MDX168 提取缓冲液进行消解处理，然后从消解的粗裂解样本中去5.2ng DNA 用于qPCR扩增。纯合子等位基因C ( 红色 )，等位基因T ( 蓝色 )，杂合子等位基因C/T ( 绿色 )，NTC ( 黑色 )和x表示未知。
PDGFRA1 基因突变
A)
B)
C)
A/A
G/A
G/G
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
取健康FFPE肺组织 (野生型)和含有PDGFRA1突变的肺肿瘤FFPE组织 (突变型) 混合在一起，使用MDX168 提取缓冲液进行消解处理，然后从消解的粗裂解样本中去5.2ng DNA用于 qPCR扩增。纯合子等位基因G ( 红色 )，等位基因A ( 蓝色 )，杂合子等位基因G/A ( 绿色 )，NTC ( 黑色 )和x表示未知。
ATM 基因突变
A)
B)
C)
T/T
C/T
C/C
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
取健康FFPE肺组织 (野生型)和含有ATM17 突变的肺肿瘤FFPE组织 (突变型) 混合在一起，使用MDX168 提取缓冲液进行消解处理，然后从消解的粗裂解样本中去5.2ng DNA用于 qPCR扩增。纯合子等位基因C ( 红色 )，等位基因T ( 蓝色 )，杂合子等位基因C/T ( 绿色 )，NTC ( 黑色 )和x表示未知。
FFPE组织粗提取 DNA vs FFPE 提纯DNA – PDGFRA1 检测
A)
B)
C)
MDX168
KAPA Probe Force qPCR Mix
TaqPath ProAmp Multiplex Master Mix
A/A
G/A
G/G
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
RFU for Allele 1 - FAM
A/使用MDX168提取缓冲液处理含有从肿瘤血管生成相关的PDGFRA1突变肺肿瘤FFPE组织 (突变型），然后取1.3 ng DNA直接进行qPCR检测； 或Qiagen QIAamp DNA FFPE 组织提取试剂盒对等量的突变型FFPE组织进行DNA提取，然后分别使用B/ KAPA Probe Force qPCR Mix (Roche)和C/ TaqPath ProAmp Multiplex Master Mix (ThermoFisher) 对1.3ng 提纯的DNA进行qPCR检测。纯合子等位基因G ( 红色 )，等位基因A ( 蓝色 )，杂合子等位基因G/A ( 绿色 )，NTC ( 黑色 )和x表示未知。结果显示，与对提纯的DNA检测相 比，Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液 (MDX168)对FFPE组织粗提取物的检测具有更强的等位基因识别和更紧密的簇集。
www.meridianbioscience.com/lifescience
在有抑制物存在的情况下可检测低至1个拷贝DNA
分别使用Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液的液体( 蓝色 )和冻干体 系( 红色 )对20% MDX168提取缓冲液中10倍稀释的合成DNA(分别为1,000,100,10和1 拷贝)进行检测。结果显示，冻干后的Lyo-Ready TM 基因分型FFPE直扩qPCR预混液具 有和液体体系具有相同水平的高效扩增能力、灵敏度和重现性。
100 copy 10 copy 1,000 copy
1 copy
液体 | 冻干
冻干后可常温保存18个月以上
A)
Allele 1
Allele 2
Allele 1/2
冻干
液体
B)
RFU for Allele 1
RFU for Allele 1
Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液冻干后在37°C下保存1个月后 ( 红色 )进行稳定性检测，将其复溶后与新鲜配置的液体体系 ( 蓝色 )进行对比，对20% MDX168提 取缓冲液存在下DNA进行检测。结果表明，冻干后的体系保留了A) qPCR中的ct值和荧光信号值，以及B)等位基因辨别能力，在冻干后在室温下可保持18个月的稳定性。
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