Lyo-Ready Genotyping Direct DNA qPCR FFPE-CN

性能数据

Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液结合了先进的化学缓冲液配方、PCR增强剂、以及优化的抗体热启动聚合酶,dNTPs和MgCl 2 为一体,并搭配提供了两管组织提取缓冲液,促进DNA释放,用于对富含PCR抑制物的FFPE粗裂解组织样本进行快速、精确和可靠的等位基因 识别和SNP检测的簇分离。

使用迈迪安MDX168提供的提取缓冲液可获得更高的DNA提取率

500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0

分别使用MDX168提供的提取缓冲液、ATL缓冲液(Qiagen)、G2缓冲液 (Qiagen)和GeneJet FFPE试剂盒提取缓冲液(ThermoFisher)对7mgFFPE肺 组织进行消解处理,并与使用Qiagen QIAamp FFPE组织DNA提取试剂盒获 得的纯化DNA进行比较(作为参考)。结果显示,与提纯的DNA或用其他市售 缓冲液消解的FFPE组织相比,用MDX168提取缓冲液处理获得的DNA产量 明显更高。说明MDX168提取缓冲液对FFPE组织具有较高的DNA提取率。 存储在MDX168提取缓冲液中的DNA在室温下可稳定达24小时,在4℃下可 稳定达3天。

MDX168 提取缓冲液

缓冲液ATL

缓冲液 G2

GeneJet 缓冲液

提纯的DNA

与其他类似试剂对FFPE样本的检测相比而得的荧光簇更紧密,等位基因辨别能力更强

KIT24和PDGFRA(Platelet Derived Growth Factor Receptor α,血小板衍生生长因子受体α)都是受体酪氨酸激酶(RTKs)信号通路的一部分。毛细 血管扩张性共济失调突变(ATM)是一种作用于p53上游的激酶,控制着解决双链DNA断裂的关键DDR通路。这三种基因突变都能在肺癌组织中发 现。 在下图中,分别使用了A/ Lyo-Ready TM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液(MDX168), B/ KAPA Probe Force qPCR Mix (Roche) 和C/ TaqPath ProAmp Multiplex Master Mix (ThermoFisher) 对肺组织FFPE样本中的不同基因进行直接检测。结果显示,与对比试剂相比,Lyo-Ready TM 可冻 干基因分型FFPE直扩qPCR预混液对肺组织FFPE粗处理样本的检测获得更紧密、更明显的簇集,能更准确地区分等位基因。

KIT24_48 基因突变

A)

B)

C)

T/T

C/T

C/C

RFU for Allele 1 - FAM

RFU for Allele 1 - FAM

RFU for Allele 1 - FAM

取健康FFPE肺组织 (野生型)和含有KIT24_48突变的肺肿瘤FFPE组织 (突变型) 混合在一起,使用MDX168 提取缓冲液进行消解处理,然后从消解的粗裂解样本中去5.2ng DNA 用于qPCR扩增。纯合子等位基因C ( 红色 ),等位基因T ( 蓝色 ),杂合子等位基因C/T ( 绿色 ),NTC ( 黑色 )和x表示未知。

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