NGS 测序建库分子酶
随着测序仪器、耗材及数据分析工具成本的降低和便携性的提升,NGS在科研、临床及工业领域正变得日益普及、经济且易用。然而,目前大多数 NGS流程仍依赖冷链运输和储存试剂。Meridian无甘油NGS建库酶支持冻干制备,提供了一种可持续、常温稳定的替代方案。高浓度配方不仅保证 了酶活性,同时非常适合满足POC设备对试剂微量化的需求。
无甘油高浓度 T4 DNA 聚合酶
无甘油 T4 DNA 聚合酶 (HC) (MDX207) 是一种依赖DNA模板的DNA聚合酶,其具有5’→3’DNA聚合酶活性,催化将核苷酸添加到DNA链的 3’末端,使 其沿5’至3’方向延伸。它还具有3’- 5’外切酶活性,可以用于5’端突出末端补平或3’端突出末端削平,但缺乏5’ - 3’外切酶活性。在NGS建库过程中, 它既可单独使用,也可作为末端修复混合液的一部分,其作用是对DNA进行片段化处理后用于末端修复,可钝化双链DNA片段的DNA末端(填充5’ 端突出末端或/和去除3’端悬空),以便随后通过T4 DNA连接酶添加适配子。
冻干后酶活性保持一致
无甘油T4 DNA聚合酶(MDX207)在其反应缓冲液中冻干,并在加速稳定性研 究中测试其稳定性。将冻干的MDX207( 红色 )在37°C放置1个月,然后与保存 在-20°C的未冻干的液体酶( 蓝色 )一起进行DNA聚合活性测试比较。结果表 明,经过加速稳定性测试,冻干后的MDX207依然具有同等酶活性,在常温下 可稳定保存12个月。
冻干 | 液体
无甘油高浓度 DNA Pol I Klenow 大片段
无甘油高浓度 DNA Pol I Klenow 大片段 (MDX208) 是来自 大肠杆菌 DNA聚合酶 I N端蛋白的水解产物,具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’-5’外切酶活 性,但没有5’-3’外切酶活性。在NGS文库制备中主要作用是末端修复,填充5’端突出末端和去除3’端悬空以对生成钝化的DNA。
反应快速且性能优异
无甘油 DNA Pol I Klenow 大片段 用于引物延伸检测。每个反应中 无甘油DNA Pol I Klenow 大片段 (HC) 的最终用量为5U,与4ng模 板和 Lyo-Ready Klenow 反应缓冲液进行反应,并在相同条件下 与其他供应商的产品进行比较。结果显示,与大多数供应商相 比,无甘油DNA Pol I Klenow大片段 (HC) 的反应速率更快,末端 荧光更高。
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