Meridian Zika Virus Chinese

寨卡病毒 用于快速诊断试剂开发的NS1 和胞膜抗原以及抗体

经蚊子传播的寨卡病毒(ZIKV)感染,因为它与新生儿神经系统畸形相关联以及它在全 球范围内的迅速蔓延而引起世界各国的关注。在2015年5月,ZIKV首次出现在巴西并已 蔓延至40多个国家和地区。

寨卡病毒重组抗原

寨卡病毒抗体

重组抗原 • 利用昆虫细胞生产 • 适合于开发酶免和快速检测试剂 • 检测ZIKV的IgG和IgM抗体 ZERO-X-REACT™ 寨卡病毒重组胞膜抗原 9050 • 经过修饰的寨卡病毒包膜抗原以消除与其他黄病毒主要保 守结构产生交叉反应 • 带有His标签 NS1 蛋白 R01636 • NS1是一个较大的保守蛋白,它被认为含有寨卡病毒特定 的表位 • 带有His标签 ZIKV胞膜蛋白 R01635 • 序列来自于非洲株(氨基酸序列受专利保护) • 胞膜蛋白包括大部分病毒体表面结构,并参与病毒复制

单抗 • 适合于开发酶免和横向层析检测试剂 • 小鼠体内法生产

针对ZIKA NS1 C01864M C01865M C01866M C01867M (配对) C01868M (配对) C01869M

蛋白和胞膜蛋白的单抗 C01860M C01861M C01862M C01863M C01938M

C01870M C01887M(配对) C01888M(配对) C01889M(配对) C01890M(配对)

多抗 • 利用山羊生产 • 适合于开发酶免和快速检测试剂 羊抗NS1蛋白 C01885G (总IgG)

• 辛酸和硫酸铵分馏 C01886G (亲和纯化) • 通过免疫亲和纯化的抗Zika NS1 并与4B琼脂糖矩阵偶联

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产品使用说明

蛋白质结构和分子量 寨卡病毒抗原是在昆虫细胞中表达并且应具有必要的蛋白转译后修饰(例如糖基化)所需要的正确三维结构。据分析,寨卡病毒 NS1的天然构象为六聚体,类似于其他NS1蛋白质。因此,其分子量的测试可能会因为所采用的技术不同而产生不同的结果(例 如,采用尺寸排阻色谱法刻意得到更高的分子量,原因是由于低聚合体的形成)。在检验报告书对于抗原分子量的描述是通过 SDS-PAGE还原法测定。 目前,急需开发可以用于在现场筛选大量样品的简便快速寨卡病毒感染诊断试剂。 现有的检测手段包括PCR检测病毒和抗体(IgM抗体/ IgG抗体)检测方法对于如何鉴别 寨卡病毒和其他黄病毒属的病毒感染仍然有待解决。此外直接针对病毒的检测(例如 PCR)仅能够在出现症状5天后检出病毒,而在此之后针对该病毒的检测则会逐渐转为阴 性。为了克服寨卡病毒检测的诊断试剂与其他黄病毒的交叉反应的问题,通常使用寨卡 病毒包膜重组抗原和NS1重组抗原。寨卡病毒IgG和IgM抗体一般对于某些病毒表位显示 出高敏感性和高特异性尤其是对于NS1抗原,它被认为是比包膜蛋白更为特定抗原表 位。寨卡病毒的生物安全等级是二级。

减少与登革热病毒的交叉反应 为了提高检测的特异性,必须去掉任何可能与其他抗原产生交叉 反应并导致错误结果的抗体。表位竞争阻断ELISA法中已经被用于 提高检测的特异性。它通过使用低浓度的未标记的登革热NS1抗 原和基孔肯雅NS1抗原可以阻断对于黄病毒中寨卡病毒,登革热 病毒,和基孔肯雅病毒有着高度交叉反应活性的抗体。

建议采用的登革热重组蛋白: R01656 (一型,NS1蛋白) R01659 (一型,膜蛋白) R01657 (二型,NS1蛋白) R01660 (二型,膜蛋白) R01658 (三型,NS1蛋白) R01661 (三型,膜蛋白) R01663 (四型,NS1蛋白) R01662 (四型,膜蛋白)

提高IgM检测灵敏度的方法 为了提高IgM抗体检测试剂的灵敏度,我们建议如下:

建议采用的寨卡病毒多抗: C01885G (总IgG) C01886G (亲和纯化) * C01886G 采用寨卡病毒NS1蛋白纯化以降低与其他 黄病毒如登革热病毒的交叉反应

1. IgM-捕获法: 使用抗 - 人IgM Fab片段抗体而不是使用完整的抗 - 人IgM抗体作为捕获抗体。这样允许更多的Fab片段的抗体结 合到固体材料表面从而增加总的可用的IgM抗体捕获位点数目。 2. 横向免疫层析法: 采用桥联接方法,即预先混合胶体金标记的病 毒特异性抗体(例如单克隆或多克隆登革热NS1抗体),重组抗 原(例如登革热NS1)和生物素化的抗人IgM。直接缀合的胶体 金的寨卡病毒抗原可以抑制其结合捕获IgM的能力。使用寨卡病 毒多抗可以进一步提高检测的灵敏度。

建议使用桥接方法以提高测定的灵敏度和特异性: • 金微粒与抗寨卡病毒NS1抗体偶联(需要优化偶联化学方法)。

金标的单抗或多抗 (如寨卡病毒NS1多抗)

• 混合重组寨卡病毒NS1抗原和抗寨卡病毒NS1抗体偶联的金微粒以形成复合物。 - 寨卡病毒NS1抗原和抗寨卡病毒NS1抗体偶联的金微粒结合的比率必须根据检测平 台进一步优化 - 在加样之前,去除所有未结合的抗寨卡病毒NS1抗体偶联的金微粒(例如通过离心 方法)。 - 为了降低与登革热病毒的交叉反应,在偶联混合物中加入重组登革热NS1抗原 (加入某一种血清型即可)。最佳稀释度必须根据最终方法来确定。

抗原(如寨卡病毒NS1)

病人样本中的抗寨卡病毒IgM

抗人IgM (俘获抗体)

寨卡病毒NS1六邻体的模型

寨卡病毒NS1与其他黄病毒的NS1蛋白具有很高的结构相 似性。并且,NS1被怀疑是引起的黄病毒感染的不同的临 床症状的主要遗传因素。 寨卡病毒NS1显示区别于其他黄病毒的特征,包括在其环 型表面同时含有正负电荷的中心区域以及朝向两末端的 负电荷。该环型表面结构被认为是在NS1六邻体与宿主以 及抗体的相互作用中起到至关重要的作用。

所示寨卡病毒NS1六才的模型是通过使用全长二型登革热 病毒NS1蛋白结构模型为参考产生。实际NS1 172-352 的结构 为橙色,预测的NS1 1-171 结构为浅灰色。 NS1 172-352 位于六 浅灰色的外层。 Song, H., Qi, J, Haywood, J., Shi, Y. and Gao, G.F. (2016). Zika virus NS1 structure reveals diversity of electrostatic surfaces among flaviviruses. Nature Structural & Molecular Biology . 23:456–458.

图1:小头畸形:定义为新生儿头部尺寸明显小于同年龄和同性 别的其他正常婴儿。

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寨卡病毒 - 背景资料

寨卡病毒与其他蚊子传播的黄病毒属疾病如登革热,日本脑炎,黄热病,西尼罗河病毒密切相关。在结构上, 它像其他黄病毒一样,是非节段,单链的,正链RNA;二十面体对称;有包膜的病毒。它的基因组包含7个非 结构蛋白和三个结构蛋白的编码。其结构蛋白包裹着病毒,而病毒RNA链的复制是在由其两种病毒糖蛋白修饰 的宿主细胞膜衍生的病毒核衣壳内进行的。寨卡病毒有两个谱系(非洲和亚洲起源)。系统发育学研究表明现 阶段在美洲蔓延的病毒与非洲基因型89%相关,而在2013 - 2014年期间,在法属波利尼西亚暴发的寨卡病毒 流行则与亚洲基因型密切相关。 寨卡病毒主要是由伊蚊(埃及伊蚊和白纹伊蚊)传播的。目前看来,它也可以通过输血和性接触传播。控制疾 病传播的措施主要是尽量减少暴露于可能被寨卡病毒感染的蚊子。不过,由于埃及伊蚊在全球分布不断扩大, 以及全球贸易和旅行(如北美和欧洲大陆)寨卡病毒可能会继续蔓延到新的领域。在此次大流行开始前,并不 知道寨卡病毒可以在人与人之间如此广泛传播并引起任何的神经系统并发症,然而寨卡病毒具备迅速变异的能 力。序列分析表明,在过去70年以来该病毒已经经历了显著的遗传变化,当然也包括亚洲和非洲人类血统的 以及蚊子种群的DNA的改变。有研究表明,这些突变可以使病毒更有效地复制,它为病毒的传播即逃避机体 的免疫应答或侵入新的组织提供了一个安全港湾。 在一般情况下,感染寨卡病毒的症状是轻微的,它只引起皮疹,发热,关节痛和不适,类似于登革热。 然而,在怀孕期间寨卡病毒则可引起严重的先天缺陷称之为小头畸形,以及其它严重胎儿大脑发育缺陷。 它同时也与其他神经系统并发症,包括格林 - 巴利综合征和听力障碍等其他情况相关连。 寨卡病毒(ZIKV)是一种蚊子传播的黄病毒,1947年在乌干达的猴子中首次被发现。 至今,寨卡病毒的流行已经在非洲,美洲,亚洲和太平洋地区被记录下来。然而,寨 卡病毒的流行在2015年5月在巴西被首次发现,从那时起已经蔓延到40多个国家和地 区。并且,已经证明,寨卡病毒是小头综合症和吉兰巴利综合症的原因。它与其他神 经系统并发症的关联也在调查中。

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May 2018

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