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问题解决和使用技巧

包膜(E)蛋白 :存在于黄病毒病毒粒子表面的显性蛋白,是中和抗体的主要目标。它含有高度保守的区域,因此针对包膜蛋白的抗 体往往是交叉反应的。 NS1蛋白: 一种糖基化的、膜相关的、具有复制和免疫逃避功能的分泌糖蛋白。NS1抗原可在感染早期(早于感染后1天)发现。此 外,NS1是血清型特异性的,对于登革热等有多个血清型循环的病毒,NS1抗原可通过酶联免疫反应对病毒进行血清型分析。 黄病毒属 (例如登革热病毒,寨卡病毒,基孔肯雅病毒,西尼罗河病毒等),它们具有高 度的同源性因而导致抗体对于抗原表位的交叉反应。这导致了黄病毒感染的鉴别诊断非 常困难,尤其是在多中黄病毒流行的热带地区。 提高IgG和IgM检测灵敏度的方法 1.  IgM-捕获法: 使用抗 - 人IgM Fab片段抗体而不是使用完整的抗 - 人IgM抗体作为捕获抗体。这样允许更多的Fab片段的抗体结 合到固体材料表面从而增加总的可用的IgM抗体捕获位点数目。 2.  横向免疫层析法: 采用桥联接方法,即预先混合胶体金标记的病毒特异性抗体(例如单克隆或多克隆登革热NS1抗体),重 组抗原(例如登革热NS1)和生物素化的抗人IgM。直接缀合的胶体金的寨卡病毒抗原可以抑制其结合捕获IgM的能力。 此 外,通过使用胶体金包被的具有广泛的识别性的多抗可以进一步提高检测试剂的灵敏度。一个多抗可以识别多个不同的抗原 表位,此外,通过使用胶体金包被的具有广泛的识别性的多抗可以进一步提高检测试剂的灵敏度。一个多抗可以识别多个不 同的抗原表位,因此可实现多个多抗同时与同一抗原结合从而产生更强的信号。

减少黃病毒科内各个病毒之间酶联免疫诊断试剂的交叉反应 为了提高检测的特异性,必须去掉任何可能与其他病毒抗原产生交叉反应并导致错误结果的抗体。 表位竞争阻断ELISA法中已经被成功地用于提高检测试剂的特异性,加强鉴别黄病毒感染诊断 试剂特异性是通过采用NS1和胞膜蛋白而实现的。即通过使用低浓度的未标记的具有引起 交叉反应的抗原来中和与之相对应的,有着高度交叉反应活性的抗体。

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