Inhibitor-Tolerant qPCR and RT-qPCR Mixes Chinese CHINESE

专为粗裂解样本(痰液、唾 液、粪便、尿液和血液)免提 取直接扩增优化的预混液配方

抗抑性 qPCR & RT-qPCR预混液 专为样本(痰液、唾液、粪便、尿液和血液) 免核酸提取直接扩增优化的预混液配方

临床与环境样本中常含有抑制剂,可能严重影响分子检测的灵敏度和准确性,导致结果不可靠。

为了克服这一问题,传统检测方法常常通过样本前处理和核酸提取来缓解抑制剂的干扰。然而,这些方法并非百分之百高效,在核酸提取的过 程中常伴随着靶标核酸的损失,并可能同时纯化出残留的抑制物,进而影响扩增反应,甚至引发假阴性结果。 Meridian迈迪安推出的通用抗抑性 qPCR / RT-qPCR 预混液,为开发多重qPCR检测提供了更优的解决方案。该系列试剂专为高抑制背景下的 快速检测而设计,适用于直接从粗裂解液或高抑制样本(如尿液、脑脊液、血液、痰液、唾液及粪便)中进行扩增,免除复杂的提取步骤,显 著简化工作流程。 通过增强体系稳定性与检测的耐受性,Meridian的创新配方有助于加速分子诊断流程,即使面对最具挑战性的样本类型,也能提供快速、可靠 的结果。

直接扩增操作流程

标准操作

样本

1

2

3

4

5

6

结果

裂解

捕捉

清洗

洗脱

反应设置

检测

直接扩增操作

样本

1

结果

检测

www.meridianbioscience.com/lifescience

抗抑性 qPCR 预混液

• 即用型 qPCR反应体系,采用专有缓冲系统,专为克服常见 PCR抑制物而设计 • 适用于从粗裂解液或未经处理的样本(如尿液、脑脊液、乳 液和血液)中直接扩增DNA • 免核酸提取,显著提升检测速度并缩短检测时间(TAT) • 支持冻干(Lyo-ready),只需加入引物和探针,即可开发常 温稳定的检测体系

产品

产品编号 体积 反应数

5 mL

500个反应

MDX013

抗抑性qPCR预混液

100 mL

10,000个反应

2 mL

500个反应

MDX073

抗抑性qPCR预混液,5x

40 mL

10,000个反应

5 mL

500个反应

可冻干抗抑性 qPCR预混液 4x

MDX184

50 mL

10,000个反应

在多种抑制剂存在的条件下,仍可实现高效 qPCR 扩增反应

通过在反应体系中添加多种已知的PCR 抑制物(如全血及其他生物体液,最终浓度为20%)进行测试,评估反应效率。结果显示,抗抑性 qPCR预混液(MDX013) 在多种常见抑制物存在的条件下,反应效率依然保持在90–110% 的理想范围内,体现出其优异的抗抑制性能。

全血样本

Amplification Plot A

Amplification Plot B

40.0

32.0 34.0 36.0 38.0

30.0

28.0

Amplification Plot C

26.0

对含有GC%(A)25%(B)46%和 (C)64%全血样本使用抗抑性qPCR预混 液( 绿色 )和其他对照试剂R( 红色 ) 和T( 蓝色 )进行扩增。

20%

10%

1%

血液比例

使用MDX013( 绿色 )与其他品牌试剂 进行对比,对1%至20%全血样本直接 检测GC含量高达64%的DNA。结果显 示,MDX013在高GC区段和高抑制背景 下依然表现出稳定可靠的扩增性能, 优于市场上其他同类产品。

牛奶、尿液和脊髓液样本

Amplification Plot

Amplification Plot

Amplification Plot

脊髓液

尿液

牛奶

将基因组DNA进行10倍系列稀释后,分别加入脑脊液、人尿液或牛全脂乳中,并使用MDX013( 绿色 )与供应商R的试剂( 红色 )进行扩增对 比。结果显示,MDX013在所有三种样本类型中均展现出更高的灵敏度,能够检测到更低浓度的DNA,并保持更优的扩增效率,明显优于供应商 R的体系。

抗抑性RT-qPCR 预混液 • 专为粗样本直接扩增设计,无需复杂或耗时的提取步骤 • 4 x 预混液,支持更大样本加样体积,提高检测灵敏度 • 单管一步法,仅需加入引物、探针和临床样本即可反应 • 支持冻干(Lyo-ready),可与引物和探针共同冻干, 开发常温稳定的检测体系 • 适用于RNA和DNA病原体的单重或多重检测

产品

产品编号 体积 反应数

5 mL

1,000个反应

抗抑性RT-qPCR 预混液4x

MDX016

50 mL

10,000个反应

5 mL

1,000个反应

抗抑性RT-qPCR预混液 Low-ROX, 4x

MDX105

50 mL

10,000个反应

5 mL

1,000个反应

可冻干抗抑性RT-qPCR 预混液 4x

MDX185

50 mL

10,000个反应

抗抑性RT-qPCR预混液对来自临床样本中的PCR抑制剂表现出高耐受性

唾液样本

10% 唾液

20% 唾液

在分别含有10%或20%的唾液拭子(COPAN ESwab 359C)中加入甲型流感 病毒,分别使用MDX016( 红色 )和常规RT-qPCR预混液( 黑色 )扩增。结 果显示,MDX016相较于标准体系具有更早的Ct值(提前约4个循环)以及更 高的荧光信号(提升约50%),充分体现出其在含有唾液拭子保存液 (UTM)样本中,对病毒RNA检测的卓越抗抑制能力与更高灵敏度。

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痰液样本

将灭活流感病毒加入含有5%人工痰液或无痰的样本中进行扩增测试。结果显示, 抗抑性RT-qPCR预混液(MDX016, 红色 )在5%痰液存在下的扩增曲线,与其在 无痰样本中的表现( 蓝色 )几乎一致,灵敏度和扩增效率未受影响。相比之下,常 规RT-qPCR预混液( 黑色 )在含痰样本中的扩增性能明显下降,灵敏度大幅降低, 显示出 MDX016 在高抑制背景下的显著优势。

1.25% 痰液

2.5% 痰液

5% 痰液

将灭活流感病毒加入不同浓度的人工痰液样本中(1.25%–5%),使用MDX016( 红色 )与常规RT-qPCR体系( 黑色 )进行扩增比较。 结果表明,MDX016对人工痰液中抑制物具有更强的耐受性,在多种痰液浓度条件下依然保持稳定、高效的扩增性能,明显优于标准 RT-qPCR Mix(参考文献Kirchner, S. 等, J Vis Exp (64), 2012)。

粪便样本

腺病毒

诺如病毒 GII

空肠弯曲菌

轮状病毒 A

将4种病原体(RNA病毒:诺如病毒、轮状病毒;DNA病原:腺病毒、 空肠弯曲菌 )混合加入不同浓度的粪便提取物:5%( 黄色 )、 10%( 红色 )、20%( 黑色 )中,使用MDX016进行多重扩增检测。结果显示,即使在最高达20%的粪便基质存在下,MDX016仍可实现稳定、 准确的多重扩增,充分展现其在高抑制背景下的强大兼容性与多重检测能力。

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