专为粗裂解样本（痰液、唾 液、粪便、尿液和血液）免提 取直接扩增优化的预混液配方
专为粗裂解样本（痰液、唾 液、粪便、尿液和血液）免提 取直接扩增优化的预混液配方 抗抑性 qPCR & RT-qPCR预混液
临床和环境样品中固有的各种不同抑制剂会对分子检测的敏感性和准确性产生负面影响。为了克服这一问题， 传统检测方法中样品在检验之前要进行预处理加工。然而，提取技术非100%有效性可能会影响可用于检测的 核酸靶标的数量，一些抑制剂可以在纯化后协同洗脱，导致假阴性检测结果。 迈迪安公司推出的抗抑性qPCR/RT-qPCR预混液可用于从粗裂解物或富含抑制物的样本(如痰液、唾液、尿液、 粪便或血液)中直接进行免核酸提取扩增。适用于要求快速周转时间或最小样品处理以防止样品丢失的定量分析。
免核酸提取直接扩增操作流程
使用迈迪安抗抑性预混液无需进行RNA/DNA提取
粗裂 解液
粗裂解液
预混液
qPCR/ RT-qPCR
引物 探针
提取样本
样本预处理
5 分钟
需要 RNA/DNA提取
引物 探针
裂解 清洗
洗脱
预混液
qPCR/ RT-qPCR
提取的 DNA或 RNA
提取样本
样本提取
20 - 60 分钟
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抗抑性 qPCR 预混液
• 即用型 qPCR预混液，专为克服常见PCR抑制剂设计的 缓冲液配方 • 适用于直接从粗解液或未经处理的样品(如尿液、脑脊液、 牛奶和血液)中进行DNA扩增 • 适用于有限样品的定量分析 • 消除样品提取的需要，加快测定周转时间
产品
产品编号 体积 反应数
5 mL
500 个反应
抗抑性qPCR 预混液
MDX013
100 mL
10,000 个反应
克服一系列抑制剂的高效PCR
耐抑性qPCR 预混液反应效率
通过对含有多种已知PCR抑制剂的样本， 如全血和生物液体以及粗组织裂解液中扩 增，每反应中添加20%样本，测定PCR反 应效率。结果表明，在有多种PCR抑制剂 存在时，抗抑性qPCR预混液的反应效率 保持在90-110%之间。
100
80
60
40
20
0
对不同液体样本类型(脑脊液，尿液，牛奶和血液）的有效扩增
全血样本
40.0 32.0 34.0 36.0 38.0 30.0 28.0 26.0
A
B
对含有GC% (A) 25% (B) 46% and (C)64% 全血样本使用抗抑性qPCR预 混液 (绿色) 和其他对照试剂 R (红色) 和T (蓝色)进行扩增。
C
20% 10% 1%
Percent Blood
对含有1%-20%全血 (GC% -64%) 的样本使用抗抑性qPCR预混液 (绿色) 和其他对照试剂进行扩增。
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牛奶、尿液和脊髓液样本
脊髓液
尿液
牛奶
将基因组DNA连续稀释10倍后加入脑脊液、人尿或牛奶中，使用抗抑性qPCR预混液（绿色)和KAPA Probe Force预混液(红色) DNA扩增。
抗抑性RT-qPCR预混液 • 适用于提取过程不复杂或不耗时的原始样品 • 4 x浓度的预混液可最大限度增加样本加样 • 简单的单管反应液，只需要添加引物，探针和 检 测样本 • 适用于检测RNA和DNA病原体的单重和多重检测
产品
产品编号 体积 反应数
5 mL
1,000 个反应
抗抑性RT-qPCR 预混液
MDX016
50 mL
10,000 个反应
抗抑性RT-qPCR预混液对来自临床样本中的PCR抑制剂表现出高耐受性
唾液样本
10%唾液
20%唾液
在分别含有10%或20%的唾液拭子(COPAN ESwab 359C)中加入甲型流感病毒，分别使用MDX016(红色)和MDX032(黑色)对甲型流感 病毒进行扩增。结果表明，与普通RT-qPCR 预混液(MDX032)相比，抗抑性RT-qPCR 预混液(MDX016) Ct值更提前并且获得荧光信号更 强。说明，抗抑性RT-qPCR 预混液(MDX016) 对检测原始唾液拭子样本中的RNA病毒性能比普通RT-qPCR M预混液(MDX032)更优越。
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痰液样本
在含5%痰液或不含痰液样本中加入灭活流感病毒进行扩增。结 果表明，使用抗抑性RT-qPCR预混液(MDX016)对含有5%痰液 的病毒样本扩增(红色)与使用快速一步法RTqPCR预混液 (MDX032)对不含痰液的病毒样本扩增(蓝色)一致。相比之下， 快速一步法RTqPCR预混液(MDX032)对含有5%痰液的病毒样本 扩增(黑色)从灵敏度和扩增性能上相比均显著降低。
1.25%痰液
2.5%痰液
5%痰液
在含1.25%痰液的样品中加入灭活流感病毒的扩增曲线。结果表明，与标准的快速一步法RT-qPCR预混液MDX032(黑色)相比， 抗抑性RT-qPCR预混液MDX016(红色)对痰液中抑制剂的耐受性更高 (Kirchner, S. et al. J Vis Exp (64) 2012) 。
粪便样本
腺病毒
诺如病毒
轮状病毒
空肠弯曲菌
分别从含有5%(黄色)、10%(红色)和20%(黑色)的粪便提取物中扩增4种病原体（诺如和轮状RNA病毒，腺病毒和空肠弯曲菌 DNA病毒)。结果显示了MDX016在粪便中抑制剂的存在下多重扩增的能力。
订购信息: Sara Zhou
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