逆转录酶 用于cDNA合成的高质量逆转录酶
逆转录酶 用于cDNA合成的高质量逆转录酶
逆转录酶是从RNA模板合成互补DNA链(cDNA)过程中的必需试剂。它的主要作用是指导第一链 cDNA的合成，然后可直接作为PCR, qPCR, LAMP或测序等检测的模板。 决定最佳逆转录酶的几个关键重要特性: 1. RNase H 活性: RNase H(核糖核酸酶H)是一种切割并降解RNA-DNA杂交链中RNA链的酶，同时可以保持DNA链的完整。如果逆转录酶的 RNA酶H活性过高，则会导致RNA模板的过度降解，引起cDNA合成不完整或效率低下。具有低RNase H活性的逆转录酶可以最大限度地减少 反应中RNA分子的非特异性降解，提高cDNA合成的特异性和保真度。 2. 持续合成能力: 持续合成能力是指在酶的单个结合事件中掺入的核苷酸数量。持续合成能力强的逆转录酶可以在更短的反应时间内合成更长的 cDNA 链。大多数经过改造的逆转录酶具有更强的合成能力(比野生型MMLV逆转录酶高65倍)。 3. 热稳定性: 耐高温能力是cDNA合成的一个重要方面，因为高温有助于使具有强二级结构和/或高GC含量的RNA变性，从而实现全长cDNA合成 和更高产量。野生型MMLV逆转录酶在37°C下表现最佳，而加工改造后的热稳定性MMLV逆转录酶可以承受高达55°C的温度，而不会对逆转录 效率产生负面影响。
迈迪安提供了几种不同的逆转录酶，每种都有独特的产品特性，例如高温稳定性或可用于开发常温稳定检测的冻干兼容性。
详情可参考产品选择表：
一步法 RT-qPCR/ RT-LAMP
两步法 RT-qPCR/ RT-LAMP
热稳定性
产品名称/特点
浓度
产品编号
55C MMLV-RT 兼容冻干或风干
MDX117
高达 60°C
200 U/ µ L
RNase-Tolerant MMLV-RT 含有RNA酶抑制剂可提高反应效率
MDX043
高达 50°C
100x
MMLV-RT RNase H活性较低
MDX044
100x
高达 45°C
Lyo-Compatible MMLV-RT 无甘油配方
MDX042
100x
www.meridianbioscience.com/lifescience
产品信息&数据详情
55C MMLV-RT (MDX117)
耐高温逆转录酶，适用于复 杂二级结构的低拷贝数RNA 靶标。
特点
• 逆转录酶耐受温度高达60°C • 适用于具有高度二级结构的RNA，如病毒基因组 • 对低拷贝数RNA靶标的高灵敏检测 • 配方可兼容冻干或风干 • 适用于开发检测的所有需求
性能数据
高温稳定性 传统的莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)不耐高温，只能在相对较低的温度(~50°C)下维持其酶活性。但是在cDNA合成的步骤当中，较高 的逆转录温度对于降低RNA二级结构对逆转录的抑制作用和减少非特异引物结合是有益处的。
MDX117与其他逆转录酶热稳定性对比
迈迪安公司开发了一款新的热稳定MMLV-RT，具有更高的热稳定性，并且降低了RNase H的活 性。 该酶可以在60°C的温度下合成第一链cDNA。对于具有复杂二级结构的RNA靶标，更高的变 性温度可提高cDNA的产量。 实验组：迈迪安的55C MMLV-RT（ 红色 ）、标准MMLV-RT( 灰色 )和SuperScript III 热稳定逆转录酶（Thermo， 黑色 ） 分别在40°C-70°C热浴10分钟后，用于多重一步法RT-qPCR检测。对比组：存储在-20°C的以上三款酶直接拿出用于同 样的多重一步法RT-qPCR检测。所得的Ct值作为基础值与实验组的酶获得的Ct值对比得到Δct值。数据表明，与其他 MMLV-RT酶相比，迈迪安的55C MMLV-RT的热稳定性有所提高，并能在60°C以下的温度下高效合成cDNA。
更高效率和灵敏度 55C MMLV-RT是专为提高逆转录效率，更高 灵敏度，提高一步法RT-qPCR检测极限(LOD) 而设计的。
B2MG
Rps18L
在多重一步法RT-qPCR检测中，使用10倍连续稀释的哺乳动物总RNA，分别使用55C MMLV-RT( 红色 )和SuperScript III (Thermo, 黑色 )进行对比检测灵敏度。 结果表明，55C MMLV-RT具有更高灵敏度和荧光强度，性能更好。
兼容冻干或风干应用 55C MMLV-RT的专有配方可以用于冻干或风干的反应设置。
Flu A
MERS-CoV
RSV
干燥体系 | 液体体系
将55C MMLV-RT加入到可风干RT-qPCR预混液中，然后通过风箱干燥( 红色 )。干燥体系复溶和与新鲜配置的液体体系( 蓝色 )对比，进行三重RT-qPCR检测，检测呼吸道RNA病毒 靶标(甲型流感、中东呼吸综合征冠状病毒和RSV)。结果显示，即使在多重RT-qPCR反应等具有挑战性的条件下，55C MMLV-RT在风干后仍保持相同的性能。
Lyo-Compatible MMLV-RT (MDX042)
高浓度，无甘油逆转录酶， 适用于开发常温温度的分子 检测。
特点
• 无甘油，适用于冻干或风干的应用 • 逆转录酶耐受温度高达45°C • 适用于大多数一步法RT-PCR检测的高质量第一链cDNA合成 • 对低拷贝数RNA靶点的灵敏检测
性能数据
更高灵敏度和特异性 MMLV-RT是一种不稳定的酶，因此通常添加甘油，因为它是一种渗透剂，在冷冻过程中可以稳定蛋白质并防止晶体形成，但是高浓度不兼容干
燥体系。高浓度的可冻干MMLV-RT克服了这些稳定性问题，去除了甘油，因此可以兼容冻干体系。 Lyo-Compatible MMLV-RT设计用于多重RT-qPCR检测，可以极灵敏地检测低拷贝RNA靶标。
肝炎病毒 (RNA)
CMV (DNA)
Lyo-Compatible MMLV-RT与可冻干qPCR 预混液 （Cat# MDX021）一起用于肝炎病毒（RNA）和 CMV（DNA）多重RT-qPCR检测中，可灵敏高效地检测 低拷贝靶标（少于5个病毒颗粒）。
RNase-Tolerant MMLV-RT (MDX043)
为一步法RT-qPCR优化的 逆转录/RNA酶抑制剂的 混合液。
特点
• 对可能含有抑制物的样品具有更高的效率 • 逆转录酶活性高达50°C • 可对低拷贝RNA标灵敏检测 • 高质量的第一链cDNA合成，适合一步RT-qPCR
性能数据
高灵敏度 RNase-Tolerant MMLV-RT 是100x、专为一步法RT-PCR优化的逆转录酶/RNA酶抑制剂混合物。RNA酶无处不在，在反应设置或样品制备过程 中很容易污染样品，即使是微量的RNA酶也可能极具破坏性，它会破坏RNA，导致cDNA产物缩短、产量低、降低RT-PCR的敏感性。RNase- Tolerant MMLV-RT中的RNA酶抑制剂是一种广谱真核生物RNA酶的高效抑制剂，对逆转录酶或聚合酶活性无抑制作用。它适用的反应温度范围 较广，可用于检测非常低水平的RNA，是血库或移植病毒检测等应用的理想选择。
对血液提纯样本中病毒的灵敏检测
使用RNase-Tolerant MMLV-RT和Low LOD 1-Step RT-qPCR 预混液（Cat# MDX025）提取自血液样本中 的HIV-2和HAV病毒进行多重RT-qPCR检测，反应包含 24个技术重复。结果显示了RNase-Tolerant MMLV-RT 的灵敏度，可以对低浓度靶标（低至5个病毒IU/mL） 进行高灵敏检测。
HIV-2 (5 IU/mL)
HAV (5 IU/mL)
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MMLV-RT (MDX044)
适用于大多数 RT-PCR和 RT-qPCR应用。
特点
• RNA酶H活性更低，产量高 • 逆转录酶最优活性为45°C • 对低浓度模板RNA的灵敏检测 • 高质量的第一链cDNA合成，适用于大多数RT-PCR和RT-qPCR检测
性能数据
高灵敏性 MMLV-RT 是100x浓度高质量逆转录酶，可从mRNA或总RNA合成互补DNA(cDNA)。 它具有较高的热稳定性和较低的RNA酶H活性，可用于高 灵敏度和高效率的长信使RNA模板合成，是检测低水平靶标的理想选择。
对钙连蛋白中1kg片段的10pg总RNA灵敏的逆转录
将总RNA（1 μg至10 pg）连续稀释5倍，用MMLV-RT进行逆转录，得到的cDNA作为 PCR模板，用引物扩增钙连蛋白中的1 kb片段。结果显示即使模板RNA的浓度很 低，MMLV-RT也具有很高的灵敏度。
订购信息
产品
产品编号 体积
反应数
50 µ L
10,000 个单位 40,000 个单位 200,000 个单位
200 µ L
55C MMLV-RT
1 mL
MDX117
10 mL 2,000,000 个单位 50 mL 10,000,000 个单位
8 µ L
1,000 个反应 10,000 个反应 1,000 个反应 10,000 个反应 50,000 个反应 1,000 个反应 10,000 个反应
Lyo-Compatible MMLV-RT
MDX042
80 µ L
200 µ L
RNase Tolerant MMLV-RT
2 mL
MDX043
210 mL 200 µ L
MMLV-RT
MDX044
2 mL
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