突破 LAMP 检测试剂原料开发瓶颈

探针法 LAMP 操作方法

酶：核糖核酸酶 HII （ RNase HII ）为核糖核酸内切酶，能水解 RNA/DNA 双链的 RNA 链。能够酶切 DNA-rN-DNA/DNA 双链

探针：设计一种单链 Taqman 探针，该探针内部嵌入了 RNA 碱基，两端分别连接荧光基团和荧光猝灭基团，并将 RNase HII 应用于扩增系统的报告体系中。由于 RNase HII 只能识别和切割双链，因此不会作用于单链的探针。原理：在合适的温度下，当环境中存在与探针互补配对的单链 DNA ，探针会与之杂交，并被 RNase HII 在特定位置切断，使荧光集团与荧光猝灭基团分离，发出荧光，互补的单链可以结合新的探针开始新一轮循环，实现信号的扩大。随着 LAMP 产物的增加，与单链 DNA 配对的探针增加，被 RNase HII 切割的单链探针也增加， LAMP 的扩增信号转化为荧光信号，实现实时可视化效果。