LAMP 体系假阳性问题
1. 气溶胶污染: 扩增后的 LAMP 反应液中含有大量 DNA 片段,一旦环境、使用工具或试剂被污染,会导致假阳性现象。 LAMP 扩增后,切勿随意打开反应管盖,以避免污染操作环境。 2. 引物二聚体非特异性扩增 非特异性扩增通常是由于引物设计不当引起,需要重新设计引物。引物的设计对 LAMP 反应质量有极大的 影响。建议在不同的反应温度下多测试几套引物,选择结果最好的一套最为最优的引物。
引物设计 软件 PrimerExplore ( http://loopamp.eiken.co.jp/e/ ) * 设计中应特别注意碱基组成、 GC 含量和二级结构等问题。
其他优化参数包括 Mg 浓度,反应温度,可以帮助降低非特异性扩增
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