二代测序(NGS)因其通量高，可扩展性和速度快彻底改变了基因组研究。NGS在临床诊断中的应 用正在迅速扩大，特别是在肿瘤学、微生物学或临床遗传学领域。 为了成功地作为诊断工具使用，二代测序生成的数据必须可靠和准确。影响测序数据质量的一个 重要因素是加载文库的质量和数量。低质量的文库会造成结果有偏差，导致覆盖度不均匀或产量 低，影响测序的准确性和可靠性。迈迪安公司提供一系列与自动化工作流兼容的二代测序文库制 备的解决方案，可实现最佳的测序结果。
二代测序 (NGS) 文库制备方案
主要应用
人体诊断 基因筛查
二代测序 (NGS)以其高通量、可扩展性和快速彻底改变了基因组研究。NGS在临床诊断中的 应用正在迅速扩大，特别是在肿瘤学、微生物学和临床遗传学领域。 作为诊断工具，NGS的数据必须可靠和准确。影响NGS数据质量的一个重要
因素是测序仪流动池上加载文库的质量和数量。低质量的文库会影 响结果，导致不均匀的覆盖或低产量，从而影响测序的准确性和 可靠性。迈迪安公司提供一系列适用于自动化操作平台的 NGS文库制备试剂，能实现最优的测序结果。
> 高特异Pfu热启动预混液
> 文库清洗及大小选择
> 文库定量
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高特异Pfu热启动预混液
由适配体热启动的高保真DNA聚合酶，适用于靶标富集和NGS文库扩增和克隆。高特异性的Pfu 混合液提供了高产量、高灵敏性、及优 质的GC-和AT-富集靶标的扩增。热启动的适配体与聚合酶可逆性地结合，在反应完成前后室温条件下抑制其活性，提高扩增的特异性。
产品亮点 • 适配体热启动，提高特异性 • 抑制剂耐受 (可用于 20%全血的直接扩增) • 针对不同GC含量（25%-65%）靶标的稳健性扩增 • 适用于二次测序文库扩增的高保真性 • 方便于室温下设置反应 • 适用于多重扩增
产品
产品编号 体积 反应数
5 mL 200 个反应 100 mL 4,000 个反应
High-Specificity Pfu HS Mix
MDX006
高GC含量(>65%) 和低GC 含量(<25%)时的低GC偏差 使用高特异Pfu热启动预混液和对比试剂 K 对金黄色葡萄球菌和球形葡萄球菌基因 组DNA进行全基因组测序，右图为GC曲 线图。 1.8 2.0
对照基因组
MDX006 无PCR反应组
对比试剂 K
1.6
将从100ng 金黄色葡萄球菌和球形葡萄 球菌基因组 DNA制备的扩增文库，与由 1μg同样DNA样本制备的无PCR扩增文库 等摩尔量混合。反应中的文库扩增包含 10个PCR循环，分别使用高特异Pfu-热启 动预混液（MDX006）或对比试剂K，遵 循各制造商的使用建议。 测序后生成GC偏差曲线，X坐标显示的 是每100个碱基对中的GC百分比含量。 高特异Pfu热启动预混液（蓝色曲线）和 对比试剂（绿色曲线）均体现了结果的均 一化覆盖，无PCR扩增的文库（黑色）在 竖向偏差上接近于1（代表着无偏差覆 盖）。结果显示，与对比试剂K相比，高 特异Pfu热启动预混液在不同GC含量覆 盖范围中呈现了较低的偏差，特别是当 GC含量高于65%时。
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
15
25
35
45
55
65
75
85
GC% of 100 base windows
Reference Genome
MDX006
Kapa
PCR-Free
高灵敏度和高产量 从人类DNA基因组的五倍稀释序列中扩增 F8基因的1.2kb片段。使用了4种不同的 DNA聚合酶，并根据制造商的建议设置所 有反应。标记物为 HyperLadder™50bp(BIO-33054)。
高特异Pfu热启动预混液
Pfu Turbo
Platinum SuperFi
Phusion II
对含有不同GC含量(29% to 65%) 的DNA有效扩增
M 29% 32% 44% 55% 62% 65%
从人类DNA 基因组中扩增出以下区域： RBB8 161 bp（29%GC），RBB8 450bp（32%GC）, Il10 417bp（44%GC）, Mpex 418bp（55%GC）, EGFR 525bp（62%GC）, EGFR 380bp（65%GC）标记物为 HyperLadder™ 50 bp（BIO-33054 ）。 结果显示，测试不同的GC含量均得到有效的扩增，证明高特异性的Pfu热启 动预混液适用于需要低GC偏差的应用。
适用于从富含抑制剂样本中多重扩增 从20%全血中直接对6个靶标进行多重扩增(961bp, 892 bp, 793 bp, 548 bp, 332 bp, 196 bp)，标记物为 HyperLadder™ 50 bp（BIO-33054 ）。 结果显示。高特异Pfu热启动预混液对含有EDTA的 20%全血多重直扩PCR反应的性能优于其他对比试 剂。
High-Specificity Pfu HS
Platinum SuperFi
Pfu Turbo Phusion II
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文库清洗及大小选择
顺磁性SPRI珠设计用于DNA片段或二代测序文库的清理和 大小选择。顺磁珠根据悬浮珠与样品的体积比选择性地结 合DNA片段。它们能够提供高度纯化的DNA片段，有效地 去除污染物，如核苷酸、引物、适配器、酶、缓冲添加剂 和盐。
有效移除引物及适配器
使用二代测序清洗和大小选 择磁珠后，电泳图显示未合 并的适配器和PCR引物(箭头) 被移除后的文库大小。
产品
产品编号 体积
50 mL 500 mL
NGS Clean and Select Beads
MDX041
双侧选择后的DNA片段尺寸分布
产品亮点 • 高度可重复性结果 • 可根据需要的片段大小选择单侧或双侧选择方法 • 可兼容手动和自动操作流程
在双侧选择法中，首先使用 左侧选择的方法去除文库中 最小的片段，然后使用不同 比例的磁珠进行右侧选择二 次纯化，移除文库中的大分 子片段。
文库定量
通过qPCR反应对连接了适配子的分子进行定量分析，从而达到对 Illumina二代测序文库进行精确定量。该试剂盒包含一系列预稀释 的标准液（可降低稀释过程中的移液误差），P5/P7Illumina ® 特异 性引物混合物和用于稀释文库样品的优化稀释缓冲液。
二代测序文库的qPCR定量
PRODUCT
CAT NO.
REACTIONS
Library Quantification Kit
MDX039
500 Rxns / Kit
产品亮点 • 适用于所有Illumina兼容文库的量化 • 90分钟内得到精确结果 • 包含一系列六种预稀释的DNA标准液，用于生成快速可靠 的标准曲线，提供精确和准确的定量 • 可用于6个96板孔共62个文库，或者2个384板孔共76个文 库的定
由Illumina ® 二代测序文库的6个预稀释DNA标准液(蓝色，浓度为10pM-100aM) 和3个稀释倍数的文库样本(红色，10倍稀释)扩增而成的qPCR标准曲线。
订购信息: Sara Zhou
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